激光共聚焦顯微鏡的使用需要注意以下要點:
嚴(yán)格按照使用規(guī)則操作,不要隨意更改操作程序。激光共聚焦顯微鏡中的激光發(fā)射管具有有限的使用壽命并且昂貴,因此,在操作和使用過程中,重要的是在開關(guān)的啟動順序和掃描過程中保護激光管。
小心不要接觸中等功率和高功率的激光輻射。特別注意不要使用激光束直接照射樣品。此外,不要在共焦顯微鏡附近存放或使用易燃或易爆物質(zhì)、液體或氣體,布或紙等易燃材料也不應(yīng)放在光路中。
在使用前,確保激光掃描共聚焦顯微鏡的軸向位置校準(zhǔn)準(zhǔn)確,以確保圖像的準(zhǔn)確性和清晰度。
根據(jù)觀察的樣本類型和目標(biāo),調(diào)整激光功率、掃描速度和圖像分辨率。如果觀察的是厚樣本或染色的樣本,需要使用較高的激光功率以穿透樣本。如果觀察的是動態(tài)過程或快速變化的過程,需要使用較快的掃描速度。如果需要高分辨率的圖像,可以使用較小的掃描區(qū)域和較小的掃描步長。
注意過度曝光問題,如果圖像過于明亮或曝光過度,會影響圖像質(zhì)量。因此,需要根據(jù)樣本類型和目標(biāo),選擇合適的曝光時間和增益。
使用合適的對照樣本,如果需要比較不同處理或條件下的樣本,需要使用合適的對照樣本以消除誤差和偏差。
儀器周圍要遠離電磁輻射源,環(huán)境無震動,無強烈的空氣擾動,室內(nèi)具有遮光系統(tǒng),保證熒光樣品不會被外源光漂白,并且環(huán)境清潔,控制工作溫度在5~25℃。
儀器應(yīng)有專門的實驗室安放,做到干凈、干燥、防震,室內(nèi)安裝空調(diào)和除濕機,溫度恒定在21℃±1℃,避免陽光直射,使用結(jié)束后蓋好防塵罩,工作人員出入儀器房要換鞋、換實驗服。
激光器的開關(guān)機順序需要特別注意,一般先開啟顯微鏡和激光器,再啟動計算機和操作軟件。關(guān)閉時,應(yīng)在激光器關(guān)閉后,待其冷卻至少10分鐘后再關(guān)閉計算機及總開關(guān)。
使用完儀器后,應(yīng)做好清潔工作,包括光學(xué)部件和機械部件的清潔。
以上是使用激光共聚焦顯微鏡時需要注意的要點,遵循這些要點可以確保儀器的正常使用和延長其使用壽命。